Case 背景介紹
前些日子跟同事們交流了一下多醣的測試方式，聽到了一些有趣的事情，開啟了查案的興趣，let’s see the dialogue
- 同事ABC：我們最近要研究多醣，正在查找定性定量的方法
- 我：附近有個專門研究某種 “多醣X” 如何生理機能影響的實驗室，應該可以問問
- 同事ABC：他們直接用酚硫酸法 (phenol-sulfuric acid)定量多醣X，用純化的延滯時間定性多醣X
- 我：!???
- 我：酚硫酸是總醣，能直接這樣換?
Case 的問題所在
我先解釋一下甚麼是酚硫酸法
酚硫酸法 (phenol-sulfuric acid) 是透過硫酸將各種醣類 (單+雙+寡+多) 水解成 (單糖)，後續在以單糖反應出來的糖醛繼續反應呈色的方法 透過該方法，可以定性醣類的存在，以及定量不特定的總醣集合 (單+雙+寡+多)，但是無法了解 (有多少量的某一群的醣)，
白話的說，這個方法可以知道有沒有醣類，可以知道有多少醣類單元。但是這些糖類單元是由哪一種數量的糖分解來的，各占多少比例也不知道。
若無其他更專一的方法配合，以這種方式來檢測 “多醣X” 的含量明顯效度不足，一定是哪裡出了問題，我先回顧一下目前多醣定性定量的參考文獻，有疏漏請指正：
A. 簡單作法：可透過測定該多醣的單醣組成，可用多糖 (自身或結構相近的多糖) 或是相對應的單糖 (須作轉化係數=0.9的校正) 拉標準曲線後做定量 B. 正常的作法：善加純化後，使用層析、質譜mass、NMR的配合來定性定量。 C 超快速法：酚硫酸，如上所述
其中 A. 屬於一種代換 (“多醣” 換成 “組成該多醣的單醣”)，比原先的方法好一點，日常的確認可以用，要到文獻論述的等級也是要 B.的作法來做主要論證依據。
至於C. 酚硫酸也算是多見的作法，只是這個方法的本質屬於 “測某個好測的全體量，來代表特定產物X的量”，效度本身就低於A, B，因此在使用前我們必須考慮他的前提與限制。
一般捨AB取C類方法的原因有以下幾點
- 先看看X變化的大趨勢、相信X很多，可以直接代表整個集合 (其他都小到可以忽略)。在這個例子中就是相信多醣的醣量很多，可以直接把其他醣的貢獻當作誤差，這是我聽過最多的 “看似正當” 的理由
- 沒有測定該X項的方法 (沒法/不準/太貴)
- 偷懶不想做、沒想清楚這件事、很相信學長姐就沒去思考背後假設的…..等
一一來回復好了
- 想要 “以全論偏” 是有極大風險的，如此轉換就必然有一個 “集合的量可以用來代表X”的量”的前提，但是至少要注意以下兩點可能會造成你的前提翻車
- “集合的量” 與 “X的量” 沒有關係，簡言之測了其實一個完全無關的量
- “集合的量” 與 “X的量” 有關，但是不穩定/不固定， “1+9” 與 “9+1” 都是10，但明顯不同
- 這是唯一可以接受的理由
- 不值一提
直接用直觀的例子來解釋，用定總澱粉的含量來考慮好了，澱粉剛好也是一種多醣
- 首先考慮的一定是去測定 “澱粉本身”，如果沒有適合如此測定的方法再說 (上面的 2.)。
- 用 “澱粉的單元組成(總醣)，然後希望靠某個倍數去修正他” 屬於剛剛提到的 “1.”
- 如果溶液內有澱粉酶amylase污染，把澱粉全部切成單糖雙糖
- 定起來的總醣量也是一樣的 (因為只是被切小了)
- 但很明顯 “總澱粉量” 完全不是這麼回事 (被切光了)。(1-2)
正確的做法，你要看是否有澱粉可以，你先用碘液滴滴看 (這方法屬於直接檢測澱粉有無的定性，信效度都足夠)，然後再針對你手上的資源和要求去決定要打MASS或是直接檢驗組成單糖就行了。
Case的後續發展與啟示
一樣用捨AB選C的三個原因來看他們的選擇：
- 以全代偏，前提是集合的量可以代表X
- 沒有測定X的方法 (沒法/不準/太貴)
- 偷懶不想做、沒想清楚這件事、很相信學長姐就沒去思考背後假設的…..等
- 如果是1. 那 “集合的量可以用來代表X” 這個前提也需要像學長一樣，用AB法自己去確認，明顯沒有
- 很明顯不屬於2.的 “沒有適合方法”，畢竟學長已經做過AB給你看了。
- 3.看起來是挺有可能的，不過A作法並不比C困難多少，應該是可以直接使用的，那為何要用一個效度更低的方式呢?
為了解到底屬於1. 還是3. 我又再次與同事A討論：
- 我：那他們之前是如何知道要取這些參數的?
- 同事A：聽說他們學長曾經有做A與B兩種做法先定性定量，並發現酚硫酸法可以一定程度代表
- 我：那後續人們有繼續做A與B?
- 同事A：沒有呢，他們挺相信學長的，就只做酚硫酸
- 我：………..抓到了 (結案)
這次的狀況明顯是前人有用的A,B方式確效後才用酚硫酸法 “以全代偏”，學長立論的主要論點還是A,B兩個方法。後人為了方便照盤全收，並未檢驗這樣的代換是否能重現，自然就出事了。
表面原因是1，但是深層原因是3
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