最近聽B學妹在抽總RNA時，遇到了一些問題一直沒辦法成功抽取，所以我就協助他看看如何解決這個問題。
由於這是一個蠻古典的實驗，做不出來大多是操作哪裡出了問題，應該是可以透過5M1E除錯框架來解決這件事情。
於是乎，我們使用了5M1E框架，為方便讀者理解，我提一下這個實驗大致上的流程圖：
- 粉碎組織
- 離心去除雜質
- digest DNA
- 各種wash
- RNA回溶
- 電泳確認RNA品質
我們嘗試了在1、3、4、6 部分的修正，然而在重複幾次實驗後，還是無法成功抽取RNA。
- (如果這麼簡單就解決那就不用寫這篇文章了)
- 流程圖也是實驗規劃和除錯上相當好用的工具，之後的文章會講
接下來我使用了還原現場法，親自盯著她的每一個步驟，然而RNA還是在我們的眼皮底下消失了，直到某一天…………
A學妹和B學妹聊天後，無意間發現B的電泳伏特數和她做的不一樣，成功的A是跑100V，失敗的B是跑50V
因為正常都是直覺跑100V，我們當時也沒想到會有人刻意調去跑50V的選項，就姑且試試看了。後來發現還真是這個原因，因為50V電壓小，相同時間跑得沒那麼開，所以之前看起來跑得很醜的膠其實是還未分離完全的條帶………..
這次抓蟲失敗了，不過我重新回顧這次debug，其實這次的正解並未脫出5M1E框架的指導
- 更改的部分確實是操作上的問題而非未知錯誤，用5M1E的前提是能成立的
- 這個是實驗流程上的細微更動，屬於”法”的部分。
那為甚麼這次沒抓到蟲呢?
其實就是因為這個部份太細微、太基本了，以致於我們沒有想到這有可能成為問題 (平常不會有人去改這個東西的，就像你平常刷牙不會刻意換手拿牙刷一樣的道理)
最後結論還是要用5M1E，只是當抓蟲多次都抓不出來時，真的就要細化到每個步驟、每個細節，因為每個細節都可能決定著成敗，細心謹慎又富有經驗的研究者才能發現潛藏的問題
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